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关键词 盐溶蛋白电泳法；玉米种子；纯度鉴定；常见问题；处理方法
中图分类号 S339.31；S513 文献标识码 B文章编号 1007-5739（2012）17-0069-01
盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度是基于品种间种子贮藏蛋白中盐溶蛋白质的组分差异来鉴定玉米种子纯度[1]。从玉米种子中提取出的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应、分子筛效应、电荷效应作用下得到分离，通过染色显示系列蛋白质谱带根据谱带差异情况鉴定玉米种子的真实性和品种纯度。该方法快速准确、经济实用，于2001年被列为行业标准。该标准是我国第一部利用种子贮藏蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度的行业标准。标准的实施为我国玉米种子室内纯度鉴定提供了重要的手段，在玉米种子纯度检验工作中得到了广泛的应用。笔者结合工作实践总结在实际使用该标准中可能遇见的问题及处理建议，以供同行们商榷。
1 凝胶液不凝或者聚合缓慢不能形成胶体
如果在胶液中加入催化剂过氧化氢后，凝胶液不凝或聚合缓慢不能形成胶体，可能由以下几个原因造成：一是药品纯度不够；二是试剂配比不当；三是胶液过期；四是催化剂失效。在实际操作中，常常会碰到分离胶能够聚合，而浓缩胶不能聚合成胶体的情况，这是因为浓缩胶对试剂纯度的要求比分离胶液更高，若出现该种情况，首先，要特别注意N，N-亚甲基甲叉双丙烯酰胺的纯度和保质期，要求其纯度最好是99.0%以上的分析纯；其次，由于抗坏血酸不稳定，极易分解，因此在胶液中可适当增大抗坏血酸的比例至标准中的1.5倍或2.0倍。可促进胶液聚合，并可有效延长胶液的保存期30～40 d。
2 点样孔破裂较多
从浓缩胶中拔出样品梳时，点样孔破裂较多，会使试验终止。这是应用电泳法检测种子纯度最常发生的情况，可能有以下几种原因，一是样品梳齿厚度不合适；二是催化剂过氧化氢的用量不合适；三是凝胶聚合的时间不够；四是拔梳子时用力不均，方式不对。通常在进行该步操作时，首先，要仔细检查样品梳齿的厚度与两玻璃板狭槽是否合适，不能过紧，要稍微有一点空隙为宜，否则凝胶聚合后，很难拔出。其次，催化剂的用量要合适，量少聚合时间长，量多聚合太快，最好先进行预试验，确定催化剂的用量及聚合时间再倒胶，按经验，通常5 mL的浓缩胶液加入5～6 μL的3%过氧化氢，聚合4～5 min，再拔出梳子较适宜。再次，拔梳子时，把短玻璃面朝向自己，双手平放在梳子的近两端处，两手均匀用力，先前后稍微平晃一下梳子，再把手放在梳子中部，前后稍微平晃一下梳子，造成梳子整体松动，然后两手先放在梳子近两端处向左右稍拉紧梳子同时再缓慢向上抬起梳子，注意如果两端梳子齿已抬起而中部梳子齿未抬起时，不能再向上抬，可把两手平放在近中部，稍倾斜往自己怀里方向缓抬，使中部梳子齿抬起，最后再把手放在梳子近两端处缓慢向上抬起，同时稍往自己怀里方向晃动，一次性拔出梳子，即可获得较满意的点样孔。
3 凝胶粘板
电泳后，从2块玻璃板中取出凝胶时，常会出现凝胶粘板不好剥离的情况。产生的原因通常：一是玻璃板清洗的不干净或有划痕。因此，在清洗玻璃板时，一定要仔细，先用软毛刷小心刷洗玻璃板两面，并在蒸馏水中浸泡然后放在玻璃架上自然晾干或烘干。二是取凝胶时温度较高。一般电泳完成后，玻璃板还很热，如果马上卸板取出凝胶就容易出现凝胶粘板不好剥离的情况。通常从胶条上取出玻璃板后稍放置一段时间，让凝胶冷却或用冷水冲玻璃板两面散发凝胶热量再卸板。也可把取下的玻璃板直接放在冷水中，通过热胀冷缩效应使玻璃板与凝胶分离再进行卸胶。
4 蛋白质谱带问题
4.1 蛋白质谱带较少或样品间普带宽窄及着色深浅不一
凝胶染色后，有的样品蛋白质谱带较少或样品间谱带宽窄及着色深浅差别较大，产生原因可能是样品制作上不规范造成[2]。一是注意样品的磨碎程度要均匀一致，颗粒不宜过粗或过细。二是粉碎的样品装入离心管时，种子胚不能丢失，因为种子胚内有大部分盐溶蛋白，胚丢失会造成蛋白谱带严重缺少。三是离心管内所装的种子颗粒以半管为宜，不宜过多，否则提取液过少，造成某些蛋白未能提取出，致使某些蛋白谱带丢失。四是样品加入提取液后在室温放置时要充分摇匀，同时注意提前时间不宜过长，以防部分蛋白质降解，造成蛋白谱带缺失，一般放置30～40 min即可进行点样。
4.2 谱带弯曲
如果染色后，有些部位蛋白谱带弯曲，可能是分离胶中加入过氧化氢时，过氧化氢分布不均匀，使得凝胶聚合不均，造成蛋白谱带弯曲[3]。在倒分离胶时，加入过氧化氢后要充分摇匀保证胶液均匀一致并注意不要有气泡再倒胶。还有可能是电泳时，电极缓冲液温度过高或凝胶液及电极缓冲液pH值不准确，改变了电泳系统的电阻，一般会使分子量小的蛋白谱带弯曲，可以通过接入冷却水的方法降低电极缓冲液的温度，另外在倒胶和加入电极缓冲液时测一下pH值，并用乳酸调整到准确时再进行电泳。
4.3 蛋白谱带模糊不清
凝胶染色后，发现蛋白谱带模糊不清，可能由以下原因产生：一是凝胶液或样品提取液存放时间过长，使得某些不稳定试剂挥发或失效，造成凝胶染色后蛋白谱带模糊不清，可考虑重新配制试剂并缩短使用期[4]。二是染色液使用次数较多，使得各成分比例不当，染色后会导致蛋白谱带模糊不清。染色液用过1次后，三***会有挥发以及考马斯亮蓝会结合在凝胶中的蛋白上，因此下次再使用时要适当添加三***和染色液。一般每200 mL染色液，下次再使用时可适当添加5～7 mL的染色原液和50 mL的三***。三是电泳时电极缓冲液温度过高或pH值不准确，导致电泳速度过快。染色后蛋白谱带变宽，模糊不清，甚至弯曲。电泳前要准确调整电极缓冲液pH值，并通过连接冷却水来降低电极缓冲液的温度。四是样品提取时，放置时间过短或过长。染色后也会造成蛋白谱带模糊不清。样品提取时放置时间过短，蛋白没有提取出或含量较少；放置时间过长，提取的蛋白会部分降解，此2种情况均会导致染色后蛋白谱带模糊不清或谱带缺失。一般提取时间在30～50 min较适宜。染色后蛋白谱带清晰，分辨率高。
5 参考文献
[1] 王玺，张宝石。玉米种子纯度鉴定技术研究进展[J].种子，2002（1）：43-45.
[2] 闫米格，许晶，骈跃斌，等。玉米种子纯度鉴定中DNA提取方法的比较研究[J].山东农业科学，2011（9）：7-8，14.
关键词 间苯二甲酸二辛酯；气相色谱-质谱联用法；食品塑料；包装材料；检测；加标回收率
中图分类号 O657.7+1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）19-0273-02
为了改变材料的功能或性质，在食品包装材料和容器的生产过程中通常会添加一些化学助剂，其直接与食品接触后会迁移到食品中，这其中最引入关注的就是增塑剂[1]。目前，这类物质的主要代表就是邻苯二甲酸酯类增塑剂（Phthalate Esters，PAEs）化合物，它们对人类产生的影响，主要表现为改变人体内分泌系统的正常功能，并对人体内未受损的器官或其后代造成不利影响。该类物质发挥着类似雌性激素的作用存在于人体和动物体内，它不仅使女性患乳腺癌的几率增加，而且甚至还会危害她们将来生育男婴的生殖系统[2-3]；同时，它还可减少男性的量和数量，甚至导致癌。
2011年的“起云剂”和2012年的白酒“塑化剂”等重大食品安全事件都是由邻苯二甲酸酯类化合物引起的，因此人们对这类物质的关注都很高。与邻苯二甲酸酯结构相似的间苯二甲酸酯也是一类十分重要的化工原料，广泛用于生产塑料、涂料、油漆、化学纤维等。间苯二甲酸酯类物质被列为环境激素类物质，因为它可能具有致癌、致畸、致突变的作用。这类物质可以对动物的内分泌调节作用产生重大影响，从而导致动物不能正常生长和发育。间苯二甲酸酯类物质主要通过食品生产加工和包装过程所接触材料迁移进入食品。间苯二甲酸酯也是高脂溶物质，主要污染鱼、肉、蛋及含油脂等食品。但目前我国对此类苯二甲酸酯的检测方法标准却是空白，甚至也很少有人研究包装材料中这类物质的检测方法。因此，我国目前缺少对这类污染物进行监管的技术条件。但随着间苯二甲酸二甲酯限量的制定，欧盟将会逐渐重视这类污染物的检测，这将对我国今后的食品和食品包装材料出口贸易产生重要的影响。此外，食品接触材料中的这类环境内分泌干扰物在与食品接触之后将迁移到食品中，造成食品污染，直接危害我国人民的身体健康。因此，必须尽快建立测定这类化合物的系列检测方法标准，确保食品安全和降低出口风险，消除技术壁垒[4]。本文使用环己烷-乙酸乙酯混合溶剂作为提取溶剂，采用凝胶渗透色谱净化技术，首次对塑料食品包装材料中间苯二甲酸二辛酯的含量进行了测定。试验结果表明该方法准确、简便、快速，结果令人满意，为食品包装材料的质量安全监管提供了技术手段。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试试剂。环己烷、乙酸乙酯（HPLC级，美国Fisher公司）；间苯二甲酸二辛酯（纯度均≥98%，Dr. Ehrenstorfer标准品公司，CAS：137-89-3）；其他试剂均为分析纯（上海国药集团）。
1.1.2 试验仪器。由美国Thermo Fisher Scientific公司生产提供的TSQ Quantum GC串联四极杆气质联用仪、Xcalibur数据采集处理系统；由德国LC-Tech公司生产提供的凝胶渗透色谱仪（GPC）；由昆山市超声仪器有限公司生产提供的KQ5200DE数控超声波清洗器。
1.2 试验方法
1.2.1 制备间苯二甲酸二辛酯标准溶液。称取间苯二甲酸二辛酯标准品（要求精确至0.1 mg），再利用正己烷将其配制成 1 000 mg/L的储备液。用环己烷-乙酸乙酯（1：1，v/v）逐级稀释成10、50、100、200、500 μg/L的标准工作溶液[5]。
1.2.2 样品前处理。首先将食品塑料包装材料粉碎成细小颗粒，要求粉碎程度达到单个颗粒
1.2.3 GC-MS分析条件。使用Rtx-5 MS毛细管气相色谱柱 （30 m×0.25 mm×0.25 μm），载气为高纯氦气，不分流进样，气体流速为1.0 mL/min。柱箱初始温度为初始柱温70 ℃，以40 ℃/min的速度升温，直至将温度升至280 ℃，保持6 min；进样器温度为280 ℃，检测器温度为280 ℃。EI离子源，230 ℃，70 ev；质量扫描方式：选择离子监测（SIM），监测离子为167、279、149和261；其相对丰度比为167∶279∶149∶261=100∶32∶26∶9；定量离子为167。标准谱图调谐。
1.2.4 建立间苯二甲酸二辛酯标准曲线。标准工作溶液经过GC-MS分析测定后，以间苯二甲酸二辛酯的标准溶液浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标，作校准曲线线性回归方程，以试样的峰面积与标准曲线比较定量。最终确定间苯二甲酸二辛酯含量在10～500 μg/L范围内呈现良好线性关系，其线性方程为Y=4313 3.3X-13 025.3（r2=0.999 8）。
1.2.5 凝胶渗透色谱条件。凝胶渗透色谱柱：320 mm×25 mm （内径）玻璃柱，Bio-beads（S-X3），200～400目，50 g；流动相：环己烷+乙酸乙酯（1∶1，v/v）；流速：5 mL/min；流出液收集时间：20～35 min。取上述提取液5 mL按照凝胶色谱条件净化，收集净化液直接用于GC-MS测定[6]。
2 结果与分析
2.1 萃取溶剂的选择
在试验过程，分别选择二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、正己烷和环己烷+乙酸乙酯（1∶1，v/v）等5种溶剂，并比较它们的萃取效率，以提高食品塑料包装材料中间苯二甲酸二辛酯的萃取效率。结果表明，当间苯二甲酸二辛酯的浓度为 100 μg/kg时，二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、正己烷和环己烷+乙酸乙酯（1∶1，v/v）等5种溶剂的加标回收率分别为92%、95%、95%、96%、97%，即5种溶剂的萃取效率相当。但使用二氯甲烷萃取聚氯乙烯塑料时，由于二氯甲烷的浓缩液为粘稠状，因此存在污染分析仪器的风险。为减少试验步骤，考虑到GPC使用的溶剂为环己烷+乙酸乙酯（1∶1，v/v），最终将萃取溶剂定为环己烷+乙酸乙酯。
2.2 定性分析
间苯二甲酸二辛酯标准物质的总离子流色谱图见图1，待测成分的保留时间为9.01 min，而加标的样品中间苯二甲酸二辛酯与标准物质的保留时间相同，且峰形表现为尖锐对称，待测物的色谱峰周围很少看到干扰色谱峰。此外，间苯二甲酸二辛酯标样全扫描质谱图见图2，比较两者的全扫描质谱图可以发现，其离子碎片主要是167、279、149和261等，且相对丰度比基本上是100∶32∶26∶9。这说明该方法分离比较完全，且具有抗干扰能力强的优势，完全可以用于对间苯二甲酸二辛酯的准确定性分析[7]。
2.3 净化条件的优化
食品包装材料印刷油墨的成分较复杂，通常会含有较多有机杂质，存在较大的基质效应，需对样品的提取液进行净化处理。提取液的一般采用固相萃取小柱进行净化，但考虑到GPC是除油墨中大分子杂质的较理想的净化方法，且容易实现自动化[4]，因此试验净化处理方法采用GPC。同时，分别将收集时间设定为10～15、10～20、10～25、10～30 min，考察流出液收集时间对于目标化合物回收率的影响。试验结果表明，以10～25、10～30 min时间段的间苯二甲酸二辛酯的平均回收率较好，最终将GPC流出液的收集时间定为10～25 min，以利于节约溶剂。通过GPC净化和富集，样品基质的背景噪音得到降低，效果很好。
2.4 空白样品的加标回收率和精密度
向空白样品中添加间苯二甲酸二辛酯标准溶液，浓度分别为0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/kg，然后利用上述方法进行检测分析，获得间苯二甲酸二辛酯的平均回收率分别为108%、81%、79%、93%和92%（表1）。试验结果表明，对于间苯二甲酸二辛酯定量测定的要求，该方法的回收率和精密度均可满足。根据对空白样品进行试验测定的检出限，确定方法的检出限为0.05 mg/kg。
3 结论与讨论
试验结果表明，笔者建立的食品塑料包装材料中间苯二甲酸二辛酯残留检测的GC-MS方法具有简单、灵敏和快速的优点，而且笔者还优化了食品塑料包装材料的提取溶剂等前处理方法和GC-MS分析仪器条件[7]，最终说明该方法可应用于食品塑料包装材料中间苯二甲酸二辛酯的定性定量检测，填补了国内空白。
4 参考文献
[1] 陈志锋，潘健伟，储晓刚，等。塑料食品包装材料中有毒有害化学残留物及分析方法[J].食品与机械，2006，22（2）：3-7.
[2] 陈军，柳艳。残留的检测[J].检验检疫科学，2008，18（6）：45-47.
[3] 张伟亚，王成云，刘丽。固相微食品包装材料中邻苯二甲酸酯增塑剂萃取气相色谱-质谱法测定塑料浸泡液中己二酸酯类增塑剂的溶出量[J].塑料科技，2007，35（2）：74-76.
[4] 张居舟，李静，何俊，等。凝胶渗透色谱-气相色谱串联质谱法同时测定食品包装材料印刷油墨中8种光引发剂[J].中国印刷与包装研究，2014，6（6）：118-123.
[5] 张磊，吴青，梁健华，等。高效液相色谱法同时测定食品塑料包装材料中8种邻苯二甲酸酯的含量[J].食品科学，2012（20）：184-188.
【摘要】 目的研究双柏凝胶剂中主要成分大黄素的透皮吸收特性，并考察了处方中其他成分对大黄素吸收的影响作用。方法采用改良的Franz扩散装置，以离体鼠皮为屏障、pH7.4磷酸盐缓冲液为接受介质，研究了大黄提取物凝胶及双柏凝胶剂中大黄素透皮吸收性能。结果在大黄提取物和双柏凝胶剂中，大黄素12 h累积透皮释药为10.03，37.06 μg·cm-1。结论大黄提取物凝胶中大黄素具有一定的透皮吸收，但不太理想，而双柏凝胶剂由于其他组分的加入，促进了大黄素的吸收，从一个方面佐证了该处方制成凝胶剂的可行性。
【关键词】 双柏凝胶剂； 大黄素； 透皮吸收
双柏散由大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、薄荷组成，具有消肿止痛，活血化瘀之功效，主要用于治疗跌打损伤早期及疮疡初起红肿热痛等症［1］。传统的蜜调散剂使用时易污染衣物，且存在较多的过敏反应。为方便使用，同时为提高药物的生物利用度，我们将其制成双柏凝胶剂。本文以大黄提取物凝胶作对比，以大黄素为指标，考察了双柏凝胶剂透皮吸收情况，从而对双柏凝胶剂的体外吸收进行初步评价。
1 仪器与试药
1.1 仪器高效液相色谱仪（日本岛津）：LC-10ATvp双泵，SLC-10Avp控制器，SPD-10Avp紫外检测器，CTO-10ASvp柱温箱。
1.2 试药大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为0756-9908)；甲醇为色谱纯；大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、薄荷由柳州市神农中药饮片厂提供，经柳州市中医院药检室鉴定，符合《中国药典》要求；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 凝胶剂的制备取处方量的大黄(A)和根据双柏散处方比例称取药材粗粉(B)，均加95%乙醇浸泡6 h，以5～7 ml/min的速度渗漉提取，相应渗漉液浓缩至约50 g，加入3 g 卡波姆940，密闭放置过夜使其充分溶胀，加蒸馏水至100 g，研匀即得。分装于密闭避光的容器中，贮存于凉处。A：大黄凝胶；B:双柏凝胶
2.2 建立测定方法
2.2.1 色谱条件
色谱柱为选Kromasil- C18 柱(5μm，250 mm×4.6 mm)；流动相为甲醇-水（6:4）；流速1.0 ml/min；检测波长254 nm；柱温30℃；进样量：10 μl。
2.2.2 对照品溶液制备
精密称取大黄素对照品5 mg，加甲醇溶解定容至25 ml，制成0.2 mg/ml的溶液，即可。
2.2.3 供试品溶液制备
精密称取凝胶剂1 g，水浴浓缩至近干，加蒸馏水10 ml，浓盐酸1 ml，沸水浴中水解30 min，再加氯仿20 ml，超声振荡20 min，置分液漏斗中分层，取氯仿层；水层用氯仿洗3次，每次10 ml，合并氯仿液，挥干。加适量甲醇溶解，转移至10 ml容量瓶中，超声振荡数分钟使溶解完全，加甲醇至刻度，摇匀。针孔式微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.4 线性关系
考察精密吸取对照品溶液用流动相稀释成0.4，1.0，2.0，4.0，10.0 μg·ml-1进样10 μl测定，以大黄素进样量（Y）和峰面积（X）进行线性回归，求得标准曲线的回归方程为：Y=3 300.3X-1 422，r=0.999 8。结果表明大黄素进样量在0.4～10 μg·ml-1范围内有良好的线性关系。
2.2.5 精密度实验
精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样测定5次，结果大黄素峰面积值的RSD=0.59%，表明仪器精密度良好。
2.2.6 稳定性实验
取供试品溶液，于0，1，2，3 h分别进样测定峰面积，结果RSD=0.42%。表明供试品在3 h内稳定。
2.3 体外透皮吸收方法
2.3.1 离体鼠皮的制备
取体质量20～22 g小鼠 ，乙醚麻醉，剪去背部毛，取皮肤剥离皮下脂肪及粘液组织，用生理盐水冲洗干净，备用。
2.3.2 接受液pH 7.4的磷酸盐缓冲液。
2.3.3 体外透皮实验装置及方法
本实验采用 Franz扩散池装置。将备用鼠皮固定在扩散池的供应室与接受室之间，使角质层面向供应室，上下夹紧后在接受室中注满接受液，驱除气泡。在供应室中分别加入1 g样品凝胶(A )及( B)。开启电磁搅拌器连续搅拌，并保持水浴温度在( 32 ±0. 5 )℃。分别在 0.5，1，2，4，6，8，12 h取样4 ml，同时补加等量同温的新鲜接受液。
2.3.4 接受液含量测定
和累积透皮量的计算取接受液4 ml供试品溶液制备项下操作得到供试品溶液。取10 μl进样，在 254 nm处测得峰面积，代入标准曲线方程，得接受液浓度，并按以下公式计算累积释药量
（Q）:C1=f(Xi)；Q=(Ci×v∑n-1i=1+Ci×4)/S。其中 f(Xi):标准曲线方程；Ci:接受液中药物浓度 ；V:接受液体积 ；S :扩散面积。
2.4 体外透皮吸收结果色谱分离结果见图1。
结果以累积透皮释药量Q对释药时间t作图 （见图2）。将数据进行模型拟合，渗透动力学符合Higuchi函数方程，即A凝胶：Q=2.751t1/2+0.704(r=0.995 3)，渗透速率为2.386 μg·h-1，而B凝胶：Q=7.615t1/2+10.542(r=0.986 7)，渗透速率为7.619 μg·h-1。
经处方配伍后，大黄中主要成分大黄素的经皮渗透效果优于其单一药物大黄制成的凝胶剂。
3 讨论
实验全部选择雄性昆明小鼠可便于取皮操作及结果数据的平行。同时以高效液相色谱法为离体鼠建立了可靠的体外测定方法，在渗透实验中，由于皮肤与介质长时间接触，皮肤中蛋白质等物质易脱落，溶解，会导致混浊或呈乳光，本文酸化样液以游离出脂溶性大黄素，然后氯仿提取，从而消除了皮肤中蛋白等成分对色谱柱的影响。
体外透皮实验中水浴设定的温度为（32±0.5）℃系最接近正常人体表皮的温度。实验中的接受液pH设定在7.4也是因其接近人体皮肤的pH值。
本实验中结果显示，由于处方中含有泽兰、侧柏叶、薄荷等其他成分，使双柏凝胶剂中大黄素的渗透作用提高，从此角度可以看出双柏凝胶剂用于局部具有一定透皮作用。但究竟是处方中的何种成分提高了大黄素的透皮吸收，由于时间及经费等方面的原因还有待于进一步的研究。
【关键词】天然药物；强极性化学成分；亲水作用色谱；反相色谱；高速逆流色谱
长期以来，由于条件的限制和方法的不成熟，对天然产物化学成分的研究多局限于脂溶性成分，关于天然药物中非极性、低极性化合物的分离纯化均有相关专著，然而根据传统用药习惯，天然药物大多用水煎服，许多有效成分如生物碱、有机酸、多糖类等都较亲水，极性强。强极性化合物的分离一直是天然产物分离工作中的难点之一，本文综述了天然药物中各类亲水性、强极性化学成分的分离纯化技术，归纳各类强极性化学成分分离纯化方案，以期系统、快速、有效的提取、分离纯化以及制备高纯度的天然化合物，为全面研究天然药物化学成分提供一定的参考。
一、层析分离
层析分离是一种经典的传统分离手段，具有分离效能高，快速简便等特点，被广泛用于黄酮类、生物碱、挥发油、蒽醌类等天然产物中化合物的分离和纯化。根据分离机理，大致可以将强极性化学成分分离层析方法归纳为以下几种。
1．亲水作用色谱。亲水作用色谱（Hydrophilic interaction liquid chromatography，HILIC）是采用极性固定相、高含量极性有机溶剂－水相缓冲液为流动相的一种分离技术，它能有效地保留反相色谱中保留弱或者不保留的强极性化合物。HILIC作为一种分离极性化合物的液相色谱模式，其概念最早是由Alpert于1990 年提出。其主要特征是使用类似于正相色谱的极性固定相和水/有机溶剂流动相与正相色谱类似，在HILIC模式下化合物的保留时间随化合物极性的增强而增加。但是，由于HILIC使用含水流动相，这就可以解决正相色谱中水溶性物质不溶于流动相的问题。近年来随着强极性化合物的分离问题引起了各个研究领域的重视及HILIC自身的优势，使得HILIC逐渐引起人们的关注。Min Liu等以Atlantis HILIC 硅胶住为固定相，乙腈/50mM甲酸铵为流动相，调pH3，梯度洗脱，成功的分离强极性化合物2-氨基咪唑（2-AMP）及其类似物3-AMP、4-AMP。
2．反相色谱。反相色谱是以表面非极性载体为固定相，而以比固定相极性强的溶剂为流动相的色谱分离模式。天然产物化合物的分离常用的反相层析柱固定相为十八烷基（ODS）。ODS反相柱可减少死吸附，有效的实现中到大极性化合物的分离。日本学者Shiji Yahara采用反复硅胶柱层析和ODS层析对新疆一枝蒿Astragalus shikokianus 40%甲醇洗脱物进行化学成分分析，得到黄酮苷astrasikokioside I。ODS柱对于极性较大的糖苷类化合物具有很好的吸附与解吸能力。多用于正丁醇部位、水部位化学经大孔树脂、硅胶等粗分后所得组分细分时所用材料。
3．正相色谱。正相色谱是采用极性固定相和相对非极性流动相，由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相液－液色谱系统一般可用于分离极性化合物，化合物保留时间随着极性的增强的加长。主要用于分离甾醇类、类脂化合物、磷脂类化合物、脂肪酸以及其他有机物。A.E. Borgund采用正己烷、二氯甲烷、甲醇混合溶剂为流动相，正相液相色谱模式分离、富集油中的有机酸，建立的方法既可以用于分离，也可以用于制备。正相色谱虽然多用来分离弱极性或非极性的烃类化合物，但条件适当，可用于分析分离苷类化合。
4．凝胶过滤色谱。凝胶色谱也叫凝胶渗透或分子筛过滤。固定相是具有一定大小孔径的多孔凝胶制成。各组分在柱内的保留时间和从柱中流出的次序决定于分子的大小，分子量大、体积大的，不能进入凝胶颗粒内部而被排阻在凝胶粒子外部，只能在颗粒间移动，较早地被溶剂冲出来，因此大分子首先从柱底流出，分子量小、体积小的化合物可自由渗入微孔扩散到凝胶颗粒内部，故通过色谱柱时阻力增大，流速变慢，最后从柱底流出，因此，各组分在凝胶柱色谱被洗脱出柱的先后顺序基本是按分子大小排列的，不受化合物极性大小的限制，故可用于强极性化合物的分离纯化。天然产物化合物分离中，用的较多的是Sephadex LH-20。在国外，很多学者采用凝胶进行分段，国内很多实验室Sephadex LH-20 用于除去色素和最后的细分。
二、高速逆流色谱
高速逆流色谱（High-speed counter current chromatography，HSCCC）是利用溶质在两相无不相容的溶剂系统中分配系数的不同，从而进行分离的色谱法。由于其无不可逆吸附，回收率两大特点，逆流色谱从逆流分配、液滴逆流色谱到现在的HSCCC历程十年，技术和设备日臻成熟，受到不同学者的关注，广泛用于中药及天然产物的研发。HSCCC在天然产物分离中成功应用在于两相溶剂系统的选择和优化。当前，HSCCC广泛的被用于分离生物碱类、黄酮类、蒽醌类等化合物。
三、膜分离技术
膜分离技术是现代分离技术领域先进的技术之一，使用膜技术(包括半透膜、超滤膜、微孔滤膜、反渗透膜等)可以在原生物体系环境下实现物质分离，可以高效浓缩富集产物，有效去除杂质。超滤法是上世纪六、七十年展起来的一种膜分离技术，是以超滤膜作为分离介质的一种膜分离技术，具有分离不同分子量分子的功能。超滤法的工作原理是含有两种或两种以上溶质的溶液，通过滤膜分离流动时，其中分子体积小的溶质，经滤膜流出，而分子体积较大的溶质，不能通过滤膜而被截留；含有一种溶质的溶液，通过滤膜可将溶质全部截留，经滤膜流出的是纯净的溶剂。超滤法的特点是有效膜面积大，分离效率高，滤速快，不易形成表面浓度极化现象，无相态变化，能耗小，可在常温下进行操作，对分离热敏性、保味性的药物更为适用。这种分离方法应用于中药有效成分的分离纯化中已显示出极大的优越性，以超滤为代表的膜分离技术曾被列为医药领域国家“八五”重点科技项目，目前，国家中医药管理局又将膜分离技术列为“十五”新药研究研发中的支持项目，相信此技术将有良好的应用前景。
四、小结与展望
天然产物开发及新药的发现经常要面对化学成分的分离问题，天然产物的化学成分极其复杂，要获得大量高纯度的单一有效成分，常要综合性地利用各种溶剂提取法及层析方法。所有的层析方法包括亲水作用色谱、反相色谱、正相色谱、凝胶色谱（Sephadex LH-20）、高速逆流色谱、膜分离，均具有选择性高、载量大、有机溶剂用量少等特点。利用这些层析纯化概念，希望能够更系统、快速、有效的提前、制备天然产物中亲水性、强极性化合物。
综上所述，纵然各种方法在天然产物开发中取得了很好的效果，但由于天然产物种类繁多，性质各异，必须针对各类甚至各个化合物的性质综合考虑提取、分离、纯化中的各个环节。针对不同的化合物性质制定特异性的分离方案，结合现代化的分析手段与药效学评价，阐明化合物结构与药效之间关系，才能更好的开发更多的具有价值的先导化合物。
参考文献
摘要：目的 研究吡喹酮水凝胶栓剂经直肠给药后在家兔体内的药动学及相对生物利用度。方法 取家兔12只，随机分为口服给药组和直肠给药组二组，给药后采用hplc法测定血药浓度。 结果 经3p97药动学程序处理吡喹酮水凝胶栓剂经直肠给药的药-时数据符合一房室开放药代动力学模型，其相对生物利用度为173.2%。 结论 吡喹酮水凝胶栓剂的生物利用度是口服给药的1.7倍，具有一定的开发价值。
关键词：吡喹酮水凝胶栓剂；高效液相色谱法；药动学；生物利用度
abstract: objective to study the pharmacokinetics and bioavailability of praziquantel liquid suppository in rabbits. method a single dose of praziquantel was orally and rectally administrated to 12 rabbits in an open randomized crossover test. hplc was selected to determine the concentration of praziquantel in plasma. result the pharmacokinetic parameters of praziquantel were obtained by3p97 program and best described by a onecompartment model. relative bioavailability of praziquantel was 173.2%. conclusion the praziquantel liquid suppository has higher bioavilability than praziquantel solution in rabbits.
key words:praziquantel liquid suppository; hplc; pharmacokinetics; bioavailability
吡喹酮（praziquantel,pzq）是人工合成的吡嗪异喹啉衍生物，为一种高效、广谱的抗血吸虫和抗绦虫药。目前临床应用的吡
喹酮制剂主要是片剂和胶囊，但口服用药首过效应大，生物利用度低，使用受到一定限制。温敏水凝胶是一种智能高分子材料，能随环境温度的变化发生可逆性的膨胀-收缩，高温收缩型水凝胶在温度低于低温临界溶解温度（lower critical solution temperature，lcst）时，凝胶在水中形成良好的水化状态，温度升高，凝胶脱水收缩［1-3］，利用此性质可以控制药物的释放。经查阅国内外有关文献，未见有吡喹酮水凝胶栓剂的报道，本文采用泊洛沙姆p407/p188［4-5］制备了吡喹酮水凝胶栓剂，并采用hplc法［6］检测其经直肠给药后家兔体内的血药浓度、药动学和生物利用度。
1 仪器、试药与实验动物
1.1 仪器与试药
美国agilent公司1100高效液相色谱仪，dad检测器，色谱柱zorbax sb-c18（4.6 mm×250 mm,5 μm），bf?2000氮气吹干仪（上海八方世纪科技有限公司）。吡喹酮原料药（上海菱玉贸易有限公司，9917%，批号0410031）；吡喹酮标准品(中国药品生物制品检定所)；吡喹酮水凝胶栓剂（2%，本室研制）;***对照品 (中国药品生物制品检定所提供)；泊洛沙姆（德国，basf公司提供）；乙腈、甲醇均为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
1.2 实验动物
大白兔（由武汉大学医学院实验动物中心提供），体质量（2.1±0.3） kg,雌雄各半。
2 实验方法及结果
2.1 色谱条件
色谱柱zorbaxsb c18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm) ，agilent色谱工作站，dad检测器； 流动相： 乙腈水（体积比70∶30）;内标： ***；检测波长：220 nm;灵敏度：0.02aufs;流速：1.00 ml・min-1;纸速：0.25 cm・min-1。
2.2 标准溶液的制备
精密称取干燥至恒重的吡喹酮5.0 mg于100 ml量瓶中，加流动相溶解后用流动相稀释配成5 μg・ml-1的标准液。精密称取干燥至恒重的***5.0 mg于100 ml量瓶中，加流动相溶解后用流动相稀释配成0.5 μg・ml-1的内标液。
2.3 血浆的处理
取空白血浆2份，各0.5 ml，置于10 ml具塞离心管中，其中1份加入适量吡喹酮标准液和20 μl内标液；各加入醋酸乙酯3 ml提取，振荡2 min，以3 000 r/min离心，取有机层经氮气吹干，残留物用100 μl流动相溶解，取20 μl进样。药物及内标物的保留时间分别为4.17和5.06 min,见图1。
2.4 标准曲线的制备
取空白血浆0.5 ml，分别置于6只10 ml具塞离心管中，加入不同量吡喹酮标准液和内标液20 μl，配成每1 ml含吡喹酮0.05、0.1、0.5、1、2、5、10 μg的溶液，按“2.3”项下，以吡喹酮与内标峰面积比值(a)对吡喹酮质量浓度(ρ)作线性回归，得标准曲线方程：a=-6.214 7+11.579 4ρ(r=0.997 3),最低检测浓度（s/n≥3）为0.05 μg・ml-1。
2.5 回收率测定
取空白血浆精密加入已知量的吡喹酮，然后按“23”项下操作，测得吡喹酮与内标峰面积比值，代入标准曲线求出各样品的浓度，将求得的浓度与已知加入的浓度相比，计算相对回收率，结果见表1。表1 回收率试验结果（略）
2.6 精密度测定
取空白血浆，精密加入低、中、高3种浓度的吡喹酮，按“2.3”项下操作，进行日内和日间精密度考察，日内各浓度测定5次，连续测定5天，计算日内、日间精密度结果见表2。表2 精密度试验结果（略）
2.7 血药浓度的测定
取雌、雄各半的健康家兔12只，禁食24 h,分为2组，每组6只。口服给药组以配制的2%ρ吡喹酮cmc-na混悬液灌胃给药。直肠给药组以吡喹酮水凝胶栓剂经直肠给药，封闭以免溢出。两组给药剂量均为40 mg/kg。给药后，于0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10 h自耳缘静脉采血2 ml。血液用肝素抗凝，离心10 min(3500 r/min)分离血浆。然后按“2.3”项下操作制备血样，进样20 μl进行含量测定，药时曲线见图2。
2.8 药动学分析
利用3p97药代统计数据包对药时曲线进行不同的代谢模型拟合，直肠给药和口服给药均与一房室模型较为接近。分别对两组家兔的药代动力学参数进行计算，结果见表3。表3 药物动力学参数（略）
3 讨 论
3.1 将吡喹酮作为治疗药物，以高温收缩型水凝胶为载体，制备得吡喹酮水凝胶栓剂。其具有以下优点：在体外呈凝胶，在体温下很快胶凝；易于从给药而无异物感，从而提高患者用药顺应性；对直肠有生物黏附性，给药约数分钟后即凝固成固体，不易遗漏；无首过效应，可大大提高其生物利用度；同时可减少对胃肠道刺激，降低不良反应的发生率。
3.2 从表3可知，直肠给药组的吸收速率常数ka为2.598 h-1，其最高血药浓度cmax为3.1073 μg・ml-1，达峰时间tmax为3.078 h；口服给药组吸收速率常数ka为1.278 h-1，其最高血药浓度cmax为1.7258 μg・ml-1，达峰时间tmax为2.146 h。这表明吡喹酮水凝胶栓剂的吸收优于吡喹酮溶液；由于吡喹酮水凝胶栓剂处方中加入生物黏附剂，当直肠给药时栓剂不向前滑动，药物不会经直肠上端静脉吸收入肝门静脉而被破坏，而经直肠下端静脉充分吸收后直接进入大循环，减少了药物的首过作用而提高了生物利用度［7］，其相对生物利用度为173.2%，是口服给药组的1.7倍。
参考文献：
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【关键词】头孢菌素类药物；凝胶色谱技术；高分子杂质
【中图分类号】R927，2
【文献标识码】A
【文章编号】1672-5158（2012）12-0391-01
目前经国内外临床试验研究证明多数抗生素所致的速发型过敏反应与药品中的高分子杂质有关，可见高分子杂质的含量对药品质量影响很大。所以为了有效提高药品的纯度及减少不良反应的发生，就要不断采取措施减少头孢菌素类药物中的高分子杂质的含量。
一、仪器与实验准备上的注意事项
在采用液相色谱仪测定抗生素中的高分子杂质含量时，应该严格遵守实验室液相色谱仪的检定规程定期进行检定。在仪器的使用过程中要认真参阅操作说明书，严格按照规范操作才能使得测量结果更加准确。
1、仪器准备
在实验准备中，如果采用自行配置的简易仪器或系统应包括输液单元、检测单元和记录及数据处理单元三部分。输液单元应能在实验过程中提供稳定的流速，而检测单元应该满足紫外检测能力，应能向色谱工作站或积分记录仪输出模拟信号，以进行数据的记录和处理。在自行配置的仪器系统中也可以参照液相色谱仪的检测规定，拟定自检规程和技术指标，也要注意定期的检定以此来保证实验的重现性。
2、凝胶色谱柱准备
在色谱柱规格的选择上应该从仪器系统的最大进样能力、所分析样品的溶解能力以及检测限度等方面综合进行考虑。通常凝胶色谱柱的体积小于柱床体积，所以一般头孢菌素抗生素高分子杂质测定的柱床体积应为60ml以上。
3、玻璃柱管的分端及凝胶介质的选取
在玻璃柱管的分端上，一般开口的玻璃柱管可以采用玻璃棉加开口橡胶塞来封端，也可以在一端烧结石英过滤板或者通过直接购买带调节头的商品玻璃柱管。凝胶色谱法在凝胶介质的选取上可选用的凝胶有很多种，目前对抗生素高分子杂质的测定多数采用的是葡聚糖凝胶，选取这种凝胶介质后一定要注意在使用之前需用水充分的溶胀，可以根据需要填制的凝胶柱柱床体积来具体计算用量。如果溶胀使采用蒸馏水浸泡的方式，也可以在温度为4℃的冰箱中放置48小时，也可在水浴中煮沸一小时，这样才能保证溶胀充分。在这两种溶胀方式中都应该注意随时搅拌出去气泡，必要情况下还可以进一步的进行真空脱气。
4、装柱
将溶胀好的凝胶介质用蒸馏水悬浮静置后，每次倾去上层液，以去除凝胶碎屑和杂质。按照这种方法进行多次洗涤，直到上层的精置液澄清为止。实践中可将凝胶介质用水制成悬浆，然后一次性的倒人垂直放置的玻璃柱管中，待凝胶颗粒沉降完毕后即完成装柱。也可在垂直放置的玻璃柱管和漏斗上放开柱管下口，保持液流顺畅，用滴灌逐管从漏斗中加入凝胶悬浆，让凝胶颗粒在蒸馏水中缓慢沉降，注意让漏斗中随时保持一定的凝胶悬浆。运用此种方法会使装柱得时间较长，必要时可以在出柱口增加负压加快装柱时间。另外需要注意新填装的色谱柱要先用水连续冲洗，这样才能让凝胶紧密均匀地填充在柱管中。
5、凝胶柱的维护及恢复
凝胶柱的维护方面要保证柱床的连续性和平整性，如果发现凝胶出现收缩或气泡的情形，就应该及时将凝胶从柱管中倒出以便重新进行装柱。如果仅仅在柱头发现少许污染或破坏，可用小勺将该部分的凝胶挖掉，然后往内加入少量水用玻棒扰动凝胶面，静置到凝胶颗粒达到重新沉降以后封闭柱头。如果在色谱柱中发生严重的非特异性吸附，就有可能改变凝胶色谱柱的分离机制，还有可能造成柱得堵塞使柱压升高，在这种晴况下就要对凝胶进行恢复性的处理。
二、系统适用性实验
系统适用性试验对溶液的制备更加注重方便性和可操作性，系统适用性试验用溶液的配制方法为用主成分对照品与杂质对照品混合配制，但还是会使得有些杂质对照品不能得到，如性质不稳定或分离提取技术要求太高等，但这些杂质峰恰恰又是与主成分峰最难分离的色谱峰。系统适用性试验目前包括很多内容，主要考察对照品测定系统与高分子杂质测定系统中蓝色葡聚糖2000溶液峰的保留时间的比值，以及理论板数和拖尾因子，以此来控制对照品测定与高分子杂质测定时仪器状态的同一性。在以蓝色葡聚糖2000的保留时间来表示高分子杂质的保留特征时，对照品色谱峰及高分子杂质色谱峰与蓝色葡聚糖2000溶液色谱峰保留时间的比值都应控制在一定的限度内，由此才能实现对色谱柱状态的正常控制。
三、操作方法上的注意事项
1、样品溶液及对照溶液的制备
具体操作中必须要按规定的标准来配制样品溶液，由于某些高浓度抗生素溶液具有一定的不稳定性，所以通常对样品溶液采取即溶即进的形式。对照溶液的制备上，要注意头孢菌高分子杂质的含量测定，通常以样品自身在SDS水溶液或纯水中的缔合物作为对照进行定量。在制备缔合物时特别要注意对浓度及水的纯度的控制，以此来保证缔合完全。
2、进样及进样方式
由于头孢菌素高分子杂质的含量测定，需要对照溶液分别在不同流动相状态下进样，所以更换流动相后凝胶色谱柱应充分平衡后才能进样。进样方式可以采用色谱仪自动进样，也可以选取手动的方式，但是两种进样方式都必须要做到色谱柱端没有死体积，这样才能避免样品的扩散造成峰展宽甚至影响分离。在自动进样操作时可以参照有关液相色谱操作规程进行，手动进样方式主要用于开口柱。
3、凝胶面的平整
手动进样时还要注意保持凝胶面的表面平整。进样前用滴灌吸掉凝胶上的液体保持色谱柱下端流畅，待柱内液体降至凝胶面之下时再用定量器具精密量取规定体积的样品溶液，然后加入到色谱柱凝胶表面上，等到样品溶液降至凝胶表面以下时再吸取少量流动相沿色谱柱管内壁缓缓加入，以洗下残留在色谱柱管壁的样品溶液，再从柱顶端加入一定量的流动相，并恢复流路，开始记录进样时间。
4、记录对照及结果
要分别记录样品和对照溶液的色谱图，积分对照溶液的峰面积和样品溶液中处于外水体积的高聚物杂质面积，按外标法以峰面积计算样品中高分子杂质的含量。按平行实验的平均值作为样品中高分子杂质含量的最终结果，并与标准规定限度比较后作出是否符合规定的判断。
5、样量分析
在一般高效液相色谱仪上使用凝胶柱，应严格限制泵压。由于一般高压液相色谱管路和检测器通路狭窄，极易发生堵塞，所以要注意尽量减少将出柱液连接到检测器的时间，尤其是新填充的色谱柱更应经水或流动相充分平衡后再连接到检测器。
关键字 蛋白质组；蛋白质组学；研究技术；分离技术
中图分类号 Q-0 文献标识码A 文章编号 1674-6708（2013）107-0135-02
0 引言
近几年基因组学的不断发展与壮大，推动了生物学技术的快速发展，使得我国在生物技术方面的研究走向成熟，大部分的病毒和原核生物等简单生物的基因组工作已经完成，而且高等生物的基因组工作也取得了很大的进步，人类的基因组研究已经顺利完成。随着科技的不断发展，在生物学界产生了许多新的技术，新的基因组研究手段与方法，可以实现对数以万计的基因表达进行检测。但是，这仅仅在生物功能的静态分析上取得了很大的进步，却依然不能达到对基因组学研究的目的。正因如此，越来越多的专家将研究矛头指向了蛋白质组的研究。只有研究基因编码和翻译的蛋白质，才能真正的了解到生物的活动特征。
1 蛋白质组概念和蛋白质组学研究的范围
在20世纪90年代根据蛋白质和基因组的技术提出了蛋白质组的概念，蛋白质组指的是一组基因或者细胞所有的蛋白质表达的情况，与基因组类似，但是与基因组不同的是，蛋白质组更注重于对研究体代谢的一系列动态过程进行研究。从蛋白质组的名称上可以了解到，蛋白质组不是针对于单一的蛋白质进行研究，而是把一组蛋白质的整体作为研究对象，最后分析出每个蛋白质的表达信息。蛋白质组学是由于蛋白质组的出现而兴起的一门生物技术学科，蛋白质组学，即一个基因组，一个细胞或组织，一种生物在一定时间，一定条件下所表达的全部蛋白组成，存在形式，活动方式及时空动态。目前蛋白质组学主要研究生理、病理或不同发育阶段下蛋白质的表达情况，对表达存在差异的蛋白质进行进一步研究，分析蛋白质之间的相互作用，蛋白质的组成结构，以及蛋白质的翻译和定位情况等。
2 蛋白质组研究的主流技术
蛋白质组研究的进展与蛋白质组研究技术的发展是不可分开的，二者之间起到相互促进的作用。随着科学的进步，对于使用生物技术进行研究的结果要求越来越高，对数据要求也越来越精确，所以蛋白质组研究的技术也在不断创新与更新，目前针对于蛋白质的分离来说，蛋白质组研究的主流技术包括双向凝胶电泳技术、差异凝胶电泳技术、质谱技术以及多维液相色谱技术等。
2.1双向凝胶电泳技术
传统的双向凝胶电泳技术由1975年建立，采用双向凝胶电泳技术进行蛋白质组分离大大的提高了分辨率，因此，在蛋白质组研究技术中一直被广泛采用。其产生双向的原理是：第一向为等电聚焦，使得带有不同电荷量的蛋白质产生电泳分离，第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，使得具有不同分子量的蛋白质产生电泳分离。
随着技术的提高，双向凝胶电泳技术也进行了完善，目前所使用的双向凝胶电泳技术中第一向利用固相pH梯度等电聚焦电泳技术来达到蛋白质组分离的效果，这样可以在保证在高分辨率的前提下，提高重复性，而且可以获得蛋白质具有的分子量多少以及其等电点信息，但是，这种方法难以实现对于极大蛋白质、极小蛋白质、极碱性蛋白质和疏水性蛋白质进行有效分离分析与研究。
2.2差异凝胶电泳技术
差异凝胶电泳技术是在双向凝胶电泳技术上发展起来的，差异凝胶电泳技术在一定程度上弥补了双向凝胶电泳技术的不足，不但提高了蛋白质组的分离效率，而且降低了劳动强度，最重要的是提高了电泳的灵敏程度。差异凝胶电泳技术的原理是对两份不同的蛋白质组研究样品做不同的标记，然后放在同一环境下进行凝胶电泳，可以直观的观察到正常的基因组和癌变的基因组的凝胶电泳结果的区别，继而可以对两种不同的蛋白质表达结果进行进一步分析与研究。
2.3质谱技术
采用质谱技术对蛋白质组进行分离的原理是：首先将蛋白质组研究样品的分子进行离子化，然后根据不同离子的质荷比不同来确定其分子量，最后实现对其进行分离。在进行蛋白质组样品分子进行离子化的时候，需要保证分子的完整性，尽量不要形成碎片离子。质谱技术通过与其他高端技术的配合，可以实现对多肽的序列进行测量。
2.4多维液相色谱技术
多维液相色谱技术是蛋白质组研究过程中最常用的色谱分离技术之一，主要是通过多种色谱分离技术的联合使用来达到多维的效果，由于科学技术的更新速度比较快，而且生物技术研究的数据量越来越多，蛋白质组研究的样品复杂程度越来越高，所以实现蛋白质组自动化分离成为必然趋势，目前，蛋白质组自动化分离系统已经形成，就是将多维液相色谱技术与串联质谱技术联合使用便可以达到快速、高效、精确的蛋白质组自动化分离。但是，这种蛋白质组分离技术依然存在一定的不足，譬如，不能实现将分子量过小的蛋白质进行分离以及不能对蛋白质的差异表达进行分析等。
3 蛋白质组生物信息学
近几年来，蛋白质组研究技术已经得到了生物信息学的高度重视，甚至大部分国家政府已经大力支持蛋白质组的研究，蛋白质组的研究为生物学和医学做出了很大的贡献，蛋白质组研究技术的发展推动了我国生物学与医学的快速发展，同时生物信息学的发展也为蛋白质组的研究工作提供有力的保证，生物信息学是在生命科学、计算机技术与严密、精确的数学科学计算上发展的交叉型学科，通过对生命科学样本的研究，以及运用数学分析与计算，利用计算机技术手段实现将得到的数据和结论信息进行收集、加工和存储。
4 结论
由于生物学科学技术的提高，蛋白质组学得到了广泛的重视，同时也受到了许多政府的大力支持，成为了基因组计划研究的核心，蛋白质领域的建立为生物学家进行蛋白质结构的研究提供了新的角度与新的研究理念。蛋白质组技术的发展，对一些细菌蛋白质的研究和对分析疾病的产生原因与治疗起着深远的影响与重要的意义。
参考文献
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